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发布时间:2022-05-21 04:10:00 作者:莱普特科学仪器
全自动核酸提取仪如何操作呢?
核酸提取仪配套试剂及其操作步骤,买了仪器后一定要考虑后续使用配套试剂的问题:
1)配套试剂是否齐全。不同样本类型的提取试剂盒产品链是否完整
2)配套试剂是不是预封装。非预封装的试剂需要实验员用移液器加入裂解液、洗涤液和洗脱液等试剂,并没有减少人工操作时间;
3)提取前除了加样本外。是否需要添加蛋白酶K,由于有些公司并没有掌握裂解液中预封装蛋白酶K且常温储存的技术,蛋白酶K需要-20℃单独保存,需即用即加。每个样本多加一步蛋白酶K,96个样本多了10~15min左右的操作时间。
4)配套试剂的保存温度。有些厂家的提取试剂需要在2—8℃运输保存,冷链运输增加运输成本,保存需要在冰箱中,而预封装提取试剂体积较大,在用量大特别像新冠这样大批量的使用,完全没有足够冰箱可以进行一段时间试剂的储存空间。
5)提取后的扩增效率。提取核酸时观察磁珠残留率并且检测提取核酸质量!
全自动核酸提取仪分类
根据仪器型号大小不同划分
1) 自动液体工作站
自动液体工作站是功能非常强大的设备,液体分液、吸液等自动完成,甚至能通过整合扩增、检测等功能,实现标本提取、扩增、检测全自动化。提取核酸只是其功能的一个应用,不太适合常规实验室提取核酸,一般都应用在单一类标本并且一次提取标本量非常大(至少96个,一般几百个)的实验需求上。自动工作站的平台建立及平台的运作,需要比较大的资金。
2) 小型自动核酸提取仪
小型的自动化仪器是通过运行结构的特殊性来达到自动提取核酸的目的,可以在任何实验室得到应用。
全自动核酸提取仪——类型介绍
磁珠法自动核酸提取仪又分为磁棒法和抽吸法
先说抽吸法:顾名思义,抽吸法就是通过自动移液装置来进行,通过自动移液装置来加入裂解液、磁珠吸附;抽走裂解液,加入漂洗液,磁珠吸附,抽走漂洗液,加入洗脱缓冲液。从步骤上好像没什么问题,但是抽吸法的问题在于,为了在去除废液的时候不抽走磁珠,移液器不能靠磁珠太近,以防磁珠连同废液被抽掉,这样每一次抽废液的时候总有一小部分不能完全的抽走,特别是磁铁在底部的装置,因为磁珠被磁铁吸附在底部,所以移液器不能靠底部太近,这样漂洗液就不能完全去除,残留的漂洗液中的盐和乙醇会影响后面的洗脱效率和PCR成功率;磁铁在侧面的装置残留的液体会少些,但是洗脱的效率也不好,依靠DNA自行溶解到洗脱缓冲液中,除非等上半小时以上,所以有些96自动核酸提取工作站,提取一轮的时间需要150分钟,32磁棒法的同样的时间可以提5轮了。
再说磁棒法核酸提取仪:通量通常有8、16、32、96通道,相对于抽吸法,磁棒法的优点是每一步的液体不残留,因为磁棒只带走磁珠,转移到下一个步骤相应的反应孔中,另外选择磁棒法的提取仪器尽量要功能更齐全的,比如可以加热,每个加热槽独立温控,这样可以设置加热、裂解、洗脱的不同温度,另外很重要的一点是,带动磁棒的电机要能带动磁棒进行液体的快速混匀和搅拌,这样才有利于自动化和有助于裂解和漂洗。磁棒法的通量选择尽量是32通道,96通道的看似通量更高,但是有个很现实的问题,96个磁力棒在从一个板转移至另外一个板的时候,磁力棒上面的液体中途滴下来怎么办,它会滴到别的孔中造成污染,而32通道的磁力棒运行轨迹不经过其他样本的上空,这样不会交叉污染。
全自动核酸提取仪的作用
伴随着分子生物学技术性的快速发展趋势,以核酸混种杂交、核酸增加及核酸编码序列剖析等为代表的分子诊断和检测设备的关键功效日益突显。试品前解决所耗费的时间段占全部解析流程的60%,而检验偏差的90%发生在前解决行业。核酸获取做为分子诊断试验重要的一步,其得到的核酸品质好坏立即危害到中下游分子生物学实验的成功与失败。
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